Цитотоксичността се отнася до скоростта на токсичните ефекти в живата клетка. Извършват се редица тестове, за да се разбере това съотношение. Всъщност тестовете, които се оценяват чрез измерване на скоростта на пролиферация и токсичните ефекти в клетката, се наричат тестове за цитотоксичност.
Тези тестове се събират по основната тема 3.
- Тестове с тетразолови соли
- LDH тест за освобождаване на ензима
- Те образуват тестове за цитотоксичност, включително луминесцентни методи.
Тестове, провеждани с помощта на тетразолови соли: Тетразолови соли са съединения, които са хетероциклични органични съединения. Той е синтезиран и идентифициран с повече от 1000 членове от годините, в които е бил открит (Altman, 1976). Наред с редукцията на тетразоловите соли чрез вземане на електрони, тя също помага да се трансформира формазан в структура, наречена промяна на цвета. Цветните реакции се откриват само в живите клетки. Тестовете с тетразол се изпитват на три етапа. В първия етап живите клетки са изложени на определено количество токсично вещество. Във втория етап, токсичното вещество се отстранява един от друг и се добавя тетразолиево съединение и се инкубира за 1-4 часа. В последните етапи промяната на цвета се измерва чрез спектрофотометричен метод и се определя броя на живите или мъртвите клетки.
Тест за освобождаване на ензим от LDH: Друг метод, използван в анализа на клетъчната жизнеспособност, е определянето на активността на лактат дехидрогеназа (LDH), освободена от увредените или мъртвите клетки в средата. (Decker и Lohmann-Matthes, 1988; Korzeniewski и Callewaert, 1983). Лактатдехидрогеназата е известна като цитоплазмен ензим, открит във всички клетки. Когато клетките са изложени на токсични ефекти, целостта на тяхната плазмена мембрана се нарушава и LDH ензимът изтича от клетките и преминава към средата. Така, оценката на увреждането се извършва чрез измерване на активността на LDH ензима след излагане.
Луминесцентни методи:
Аламар син флуоресцентен тест и други флуоресцентни методи: Alamar синия тест за първи път е използван от лицата на Erb и Ehlers (1950) за определяне на бактериалното замърсяване в биологични течности и мляко, а по-късно в проучването на Ahmed et al. (1950) адаптира тези тестове като страничен вариант към теста за включване на радиоактивен [1994 H] тимидин. Този метод се основава на превръщането на съединението, наречено аламар синьо (резазурин), в resorufin съединението заедно с живите клетки. Resazurine е известен като окислително синьо оцветяване, което преминава свободно през клетъчната мембрана, за да влезе в клетката, където се редуцира и трансформира във флуоресцентно розово ресоруфиново съединение. Мъртвите клетки не могат да намалят резазурин и не са в състояние да генерират флуоресцентен сигнал поради загуба на метаболитна активност. Полученият сигнал се открива чрез използването на флуоромери и интензивността се увеличава с увеличаване броя на жизнеспособните клетки.
Тест за биолуминисценция на АТФ: Разградителите на аденозин трифосфат (АТР) действат като енергийни източници с биологични системи и могат да бъдат намерени във всички метаболитно активни клетки. (Crouch et al., 1993). След клетъчна смърт, ATP синтезираното състояние на клетката изчезва и ендогенните АТФази изпълняват бързо разграждане на лесно АТР. Поради тази причина, съдържанието на вътреклетъчен АТР е описано като основен индикатор за жизнеспособността на клетките и се превръща в един от методите за определяне на жизнеспособността. АТР биолуминесцентният тест е определен като най-бърз, най-чувствителен и най-лесен метод сред тестовете за жизнеспособност, извършени в кратни (Lomakina et al., 2015; Riss et al., 2006).
Тест за биолуминесценция в реално време: Повечето от тестовете за жизнеспособност са във формата на краен формат, чиито клетки не са унищожени или е позволено да бъдат допълнително изследвани, което прави кинетиката и анализа в реално време на токсични вещества невъзможни. Тъй като токсичността е зависима от времето и дозата, ефектите на различните дозови диапазони могат да бъдат разбрани само при изследване в различни времена. Подобно на АТР биолуминесцентния тест, луциферазният ензим също се използва в този анализ, но ензимът на луцифераза, използван в този анализ, се получава от различен организъм. Като луциферазен процес се използва вещество, наречено целентеразин.
Можете да работите с нашата лаборатория EUROLAB за тестове за цитотоксичност.