Tests de cytotoxicité

Laboratoire d'essais de cytotoxicité

La cytotoxicité fait référence au taux d'effets toxiques dans une cellule vivante. Un certain nombre de tests sont effectués pour comprendre ce rapport. En fait, les tests évalués en mesurant le taux de prolifération et les effets toxiques dans la cellule sont appelés tests de cytotoxicité.

Ces tests sont rassemblés sous le sujet principal 3.

  • Essais avec des sels de tétrazolium
  • Test de libération d'enzymes LDH
  • Ils forment des tests de cytotoxicité comprenant des méthodes de luminescence.

Essais réalisés à l'aide de sels de tétrazolium: Les sels de tétrazolium sont des composés organiques hétérocycliques. Il a été synthétisé et identifié avec plus de membres 1000 depuis les années de sa découverte (Altman, 1976). Parallèlement à la réduction des sels de tétrazolium en prenant des électrons, il contribue également à transformer le formazan en une structure appelée changement de couleur. Les réactions colorées ne se rencontrent que dans les cellules vivantes. Les tests au tétrazolium se déroulent en trois étapes. Dans la première étape, les cellules vivantes sont exposées à une certaine quantité de substance toxique. Dans la deuxième étape, la substance toxique est séparée de l'autre et le composé de tétrazolium est ajouté et incubé pendant 1-4 heures. Dans les dernières étapes, le changement de couleur est mesuré par une méthode spectrophotométrique et le nombre de cellules vivantes ou mortes est déterminé.

Test de libération d'enzymes LDH: Une autre méthode utilisée dans l'analyse de la viabilité cellulaire est la détermination de l'activité de la lactate déshydrogénase (LDH) libérée dans le milieu par les cellules endommagées ou mortes. (Decker et Lohmann-Matthes, 1988; Korzeniewski et Callewaert, 1983). La lactate déshydrogénase est une enzyme cytoplasmique présente dans toutes les cellules. Lorsque les cellules sont exposées à des effets toxiques, l’intégrité de leur membrane plasmatique est perturbée et l’enzyme LDH fuit des cellules et passe dans le milieu. Ainsi, l'évaluation des dommages est effectuée en mesurant l'activité de l'enzyme LDH après exposition.

Méthodes de luminescence:

Test de fluorescence au bleu Alamar et autres méthodes de fluorescence: Le test au bleu Alamar a été utilisé pour la première fois par des personnes d'Erb and Ehlers (1950) pour la détermination de la contamination bactérienne dans les fluides biologiques et le lait, puis dans l'étude de Ahmed et al. (1950) a adapté ces tests comme option secondaire au test d’incorporation de [1994 H] thymidine radioactive. Cette méthode est basée sur la conversion du composé appelé bleu alamar (résazurine) en composé de résorufine avec les cellules vivantes. La résazurine est connue sous le nom de rédox oxydant bleu, qui passe librement à travers la membrane cellulaire pour pénétrer dans la cellule, où elle est réduite et transformée en un composé de résorufine rose fluorescent. Les cellules mortes ne peuvent pas réduire la résazurine et ne sont pas capables de générer un signal de fluorescence en raison d'une perte d'activité métabolique. Le signal résultant est détecté par l'utilisation de fluoromètres et son intensité augmente avec le nombre de cellules viables.

Test de bioluminescence de l’ATP: Les agresseurs d’adénosine triphosphate (ATP) agissent comme source d’énergie avec les systèmes biologiques et peuvent être trouvés dans toutes les cellules métaboliquement actives. (Crouch et al., 1993). Après la mort cellulaire, l’état de synthèse de la cellule par l’ATP disparaît et les ATPases endogènes dégradent rapidement l’ATP. Pour cette raison, la teneur en ATP intracellulaire a été décrite comme le principal indicateur de la viabilité cellulaire et devient l'une des méthodes de détermination de la viabilité. Le test de bioluminescence ATP a été défini comme étant la méthode la plus rapide, la plus sensible et la plus simple parmi les tests de viabilité effectués en multiples (Lomakina et al., 2015; Riss et al., 2006).

Test de bioluminescence en temps réel: La plupart des tests de viabilité se présentent sous la forme d'un format de point final dont les cellules n'ont pas été détruites ni analysées, ce qui rend impossible la cinétique et l'analyse en temps réel des substances toxiques. Étant donné que la toxicité dépend du temps et de la dose, les effets de différentes plages de dose ne peuvent être compris qu'en étudiant différentes périodes. Semblable au test de bioluminescence de l'ATP, l'enzyme luciférase a également été utilisée dans ce test, mais l'enzyme luciférase utilisée dans ce test a été obtenue à partir d'un organisme différent. En tant que processus luciférase, une substance appelée coelenterazine est utilisée.

Vous pouvez travailler avec notre laboratoire EUROLAB pour les tests de cytotoxicité.