ციტოტოქსიკური ტესტები

ციტოტოქსიურობის ტესტის ლაბორატორია

ციტოტოქსიურობა გულისხმობს ცოცხალ საკანში ტოქსიკური ეფექტების მაჩვენებელს. ამ ტესტის გასარკვევად მთელი რიგი ტესტები ხორციელდება. სინამდვილეში, ტესტები, რომლებიც შეფასებულია უჯრედების პროლიფერაციის მაჩვენებლისა და ტოქსიკური ეფექტების გაზომვით, ციტოტოქსიურობის ტესტები ეწოდება.

ეს ტესტები იკრიბება მთავარი თემის ფარგლებში 3.

  • ტესტები ტეტრაზოლიუმის მარილებით
  • LDH ენზიმის გათავისუფლების ტესტი
  • ისინი ქმნიან ციტოტოქსიურობის ტესტებს, მათ შორის luminescence მეთოდებს.

ტეტრაზოლიუმის მარილების დახმარებით ჩატარებული ტესტები: ტეტრაზოლიუმის მარილები არიან ჰეტეროციკლური ორგანული ნაერთები. იგი სინთეზირებულია და იდენტიფიცირებულია უფრო მეტი, ვიდრე 1000- ის წევრებისგან, რომლებიც აღმოაჩინეს (Altman, 1976). ელექტრონების მიღებისას ტეტრაზოლიუმის მარილების შემცირების გარდა, იგი ასევე ხელს უწყობს ფარმაცევტს გარდაქმნას სტრუქტურაში, რომელსაც ფერის ცვლილება გააჩნია. ფერი რეაქციები მხოლოდ ცოცხალ უჯრედებშია. Tetrazolium ტესტები გამოცდილია სამ ეტაპად. პირველ ეტაპზე ცოცხალი უჯრედები გარკვეულ ტოქსიკურ ნივთიერებას ექვემდებარება. მეორე ეტაპზე, ტოქსიკური ნივთიერება ერთმანეთისაგან ამოღებულ იქნა და ტეტრაზოლიუმის ნაერთი დაემატება და ინერტდება 1-4 საათის განმავლობაში. ბოლო ეტაპზე ფერადი ცვლილება იზომება სპექტროფოტომეტრიული მეთოდით და ცოცხალი ან მკვდარი უჯრედების რაოდენობის განსაზღვრა.

LDH ენზიმის გათავისუფლების ტესტი: საკანში სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზში გამოყენებული სხვა მეთოდი არის ლაქტატის დეჰიდრაგენეზის (LDH) აქტივობის განსაზღვრა დაზიანებული ან მკვდარი უჯრედებისგან, რომელიც გათავისუფლდება საშუალო. (Decker და Lohmann-Matthes, კორეენევსკი და კალლევატი, 1988). ლაქტატის დეჰიდროგენაზა ცნობილია, როგორც ციტოპლაზმური ფერმენტი ყველა საკნებში. როდესაც უჯრედები ექვემდებარებიან ტოქსიკურ ეფექტებს, მათი პლაზმური მემბრანის მთლიანობა შეუშალა და LDH ენზიმის გაჟონვები უჯრედებიდან და გადის საშუალოზე. ამდენად, დაზიანების შეფასება ხორციელდება LDH ფერმენტის აქტივობის გაზომვის შემდეგ.

Luminescence მეთოდები:

Alamar Blue Fluorescence Test და სხვა ფლუორესცენციის მეთოდები: Alamar ლურჯი ტესტი პირველად გამოიყენება Erb და Ehlers (1950) პირების განსაზღვრა ბაქტერიული დაბინძურების ბიოლოგიური სითხეები და რძე, მოგვიანებით შესწავლა აჰმედ და ალ. (1950) ადაპტირებული ამ ტესტების როგორც გვერდითი ვარიანტი რადიოაქტიური [1994 H] thymidine მქონე ტესტირება. ეს მეთოდი ეფუძნება ცოცხალ უჯრედებთან ერთად რეზორუფინის ნაერთს ნაერთებს, ალამარის ლურჯი (რეზაზურინის) გარდაქმნას. რეზაზურნი ცნობილია, როგორც ჟანგვითი ლურჯი საღებავი რედოქსი, რომელიც უჯრედის შეყვანისას თავისუფლად გადის საკანში, სადაც მცირდება და გადაქცეულია ფლუორესცენტურ ვარდისფერ resorufin ნაერთად. მკვდარი უჯრედები ვერ შეამცირონ რეზაზურინს და ვერ ახერხებენ მეტაბოლური აქტივობის დაკარგვის გამო ფლუორესცენციის სიგნალის წარმოქმნას. შედეგად გამოვლენილი სიგნალი გამოვლენილია fluorometers და ინტენსივობა იზრდება, როგორც სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რიცხვი.

ATP Bioluminescence Test: Adenosine triphosphate (ATP) molesters იმოქმედოს როგორც ენერგიის წყაროების ბიოლოგიური სისტემების და შეიძლება ყველა მეტაბოლურად აქტიური უჯრედები. (კრაუჩი და სხვ., 1993). უჯრედის გარდაცვალების შემდეგ, ATP- ის სინთეზის მდგომარეობა უჯრედის ქრება და ენდოგენური ATP- ები ასრულებენ ATP- ის სწრაფად დეგრადაციას. ამ მიზეზით, Intracellular ATP კონტენტი აღწერილია, როგორც უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობის მთავარი მაჩვენებელი და ხდება სიცოცხლისუნარიანობის განსაზღვრის ერთ-ერთი მეთოდი. ATP ბიომუმინესცენციის ტესტი განისაზღვრა როგორც სწრაფი, ყველაზე მგრძნობიარე და უმარტივესი მეთოდი მრავალბინიანად შესრულებული სიცოცხლისუნარიანობის ტესტებში (Lomakina et al., 2015; Riss et al., 2006).

რეალურ დროში Bioluminescence Test: სიცოცხლისუნარიანობის ტესტების უმრავლესობა საბოლოო წერტილის ფორმაა, რომლის უჯრედები არ არის განადგურებული ან დაშვებულია შემდგომი გამოკვლევა, რაც კინეტიკას და ტოქსიკური ნივთიერებების რეალურ დროში ანალიზს შეუძლებელს ხდის. იმის გამო, რომ ტოქსიკურობის დროა და დოზა დამოკიდებულია, სხვადასხვა დოზების მერყევი ეფექტები შეიძლება მხოლოდ გაგებული იყოს სხვადასხვა დროს. ATP- ის ბიომუმინესცენციის მსგავსად, ამ სავარაუდოდ გამოყენებულ იქნა luciferase ფერმენტი, თუმცა ამ ასაკში გამოყენებული luciferase ფერმენტი მიღებული იქნა სხვადასხვა ორგანიზმისგან. როგორც luciferase პროცესი, ნივთიერება მოუწოდა coelenterazine გამოიყენება.

თქვენ შეგიძლიათ იმუშაოთ ჩვენი ლაბორატორია EUROLAB ციტოტოქსიურობის ტესტებისთვის.

სამედიცინო ლაბორატორია