Cytotoxiciteit verwijst naar de snelheid van toxische effecten in een levende cel. Een aantal tests worden uitgevoerd om deze verhouding te begrijpen. In feite worden de testen die worden geëvalueerd door het meten van de proliferatiesnelheid en toxische effecten in de cel cytotoxiciteitstests genoemd.
Deze tests worden verzameld onder het hoofdonderwerp 3.
- Proeven met tetrazoliumzouten
- LDH-enzym-afgiftetest
- Ze vormen cytotoxiciteitstests inclusief luminescentiemethoden.
Tests uitgevoerd met behulp van tetrazoliumzouten: tetrazoliumzouten zijn verbindingen die heterocyclische organische verbindingen zijn. Het is gesynthetiseerd en geïdentificeerd met meer dan 1000-leden uit de jaren dat het werd ontdekt (Altman, 1976). Samen met de reductie van de tetrazoliumzouten door elektronen te nemen, helpt het ook om de formazan te transformeren in een structuur die kleurverandering wordt genoemd. Kleurreacties worden alleen in levende cellen gevonden. Tetrazolium-tests worden in drie fasen ervaren. In de eerste fase worden de levende cellen blootgesteld aan een bepaalde hoeveelheid giftige stof. In de tweede stap wordt de toxische stof uit elkaar verwijderd en wordt tetrazoliumverbinding toegevoegd en geïncubeerd gedurende 1-4 uur. In de laatste stadia wordt de kleurverandering gemeten door middel van een spectrofotometrische methode en vindt de bepaling van het aantal levende of dode cellen plaats.
LDH enzymtest: een andere methode die wordt gebruikt voor de analyse van de levensvatbaarheid van cellen, is de bepaling van de lactaatdehydrogenase (LDH) -activiteit die door de beschadigde of dode cellen in het medium wordt afgegeven. (Decker en Lohmann-Matthes, 1988; Korzeniewski en Callewaert, 1983). Lactaatdehydrogenase is bekend als een cytoplasmatisch enzym dat in alle cellen wordt aangetroffen. Wanneer de cellen worden blootgesteld aan toxische effecten, wordt de integriteit van hun plasmamembraan verstoord en lekt het LDH-enzym uit de cellen en gaat het naar het medium. De schadebeoordeling wordt dus uitgevoerd door de LDH-enzymactiviteit na blootstelling te meten.
Luminescentiemethoden:
Alamar Blue Fluorescence Test en andere fluorescentiemethoden: de Alamar blue-test werd voor het eerst gebruikt door Erb en Ehlers (1950) personen voor de bepaling van bacteriële contaminatie in biologische vloeistoffen en melk, en later in de studie van Ahmed et al. (1950) paste deze tests aan als een zijoptie voor de radioactieve [1994 H] thymidine-inbouwtest. Deze methode is gebaseerd op de omzetting van de verbinding genaamd alamar blue (resazurin) naar de resorufin-verbinding samen met de levende cellen. Resazurine staat bekend als een oxidatieve blauwe kleurstof redox, die vrij door het celmembraan stroomt om de cel binnen te gaan, waar het wordt gereduceerd en omgezet in een fluorescente roze resorufineverbinding. Dode cellen kunnen resazurine niet verminderen en zijn niet in staat om een fluorescentiesignaal te genereren vanwege verlies van metabole activiteit. Het resulterende signaal wordt gedetecteerd door het gebruik van fluorometers en de intensiteit neemt toe naarmate het aantal levende cellen toeneemt.
ATP Bioluminescentietest: Adenosine trifosfaat (ATP) molesters werken als energiebronnen met biologische systemen en kunnen worden gevonden in alle metabolisch actieve cellen. (Crouch et al., 1993). Na celdood verdwijnt de ATP-synthesetoestand van de cel en endogene ATPasen voeren snelle afbraak van gemakkelijk ATP uit. Om deze reden is het intracellulaire ATP-gehalte beschreven als de belangrijkste indicator voor cellevensvatbaarheid en het wordt een van de methoden voor de bepaling van de levensvatbaarheid. ATP-bioluminescentietest is gedefinieerd als de snelste, meest gevoelige en gemakkelijkste methode van de levensvatbaarheidstests uitgevoerd in veelvouden (Lomakina et al., 2015; Riss et al., 2006).
Realtime bioluminescentietest: de meeste levensvatbaarheidstests hebben de vorm van een eindpunt, waarvan de cellen niet zijn vernietigd of die verder onderzocht kunnen worden, waardoor kinetiek en real-time analyse van toxische stoffen onmogelijk is. Omdat toxiciteit tijds- en dosisafhankelijk is, kunnen de effecten van verschillende dosisbereiken alleen worden begrepen door in verschillende tijden te bestuderen. Vergelijkbaar met de ATP bioluminescentie assay, werd het luciferase enzym ook gebruikt in deze assay.Het luciferase enzym gebruikt in deze assay werd echter verkregen van een ander organisme. Als het luciferaseproces wordt een substantie genaamd coelenterazine gebruikt.
U kunt met ons laboratorium EUROLAB werken voor cytotoxiciteitstests.