Цитотоксичность относится к степени токсического воздействия на живую клетку. Ряд тестов проводится, чтобы понять это соотношение. На самом деле тесты, которые оцениваются путем измерения скорости пролиферации и токсических эффектов в клетке, называются тестами на цитотоксичность.
Эти тесты собраны под основной темой 3.
- Испытания с солями тетразолия
- Тест высвобождения фермента ЛДГ
- Они формируют тесты на цитотоксичность, включая методы люминесценции.
Испытания, проводимые с помощью солей тетразолия. Соли тетразолия представляют собой соединения, которые являются гетероциклическими органическими соединениями. Он был синтезирован и идентифицирован более чем с членами 1000 с тех лет, когда он был обнаружен (Altman, 1976). Наряду с восстановлением солей тетразолия за счет поглощения электронов, это также помогает преобразовать формазан в структуру, называемую изменением цвета. Цветовые реакции обнаруживаются только в живых клетках. Испытания тетразолия проходят в три этапа. На первом этапе живые клетки подвергаются воздействию определенного количества токсического вещества. На втором этапе токсическое вещество удаляют друг от друга, добавляют соединение тетразолия и инкубируют в течение часов 1-4. На последних этапах изменение цвета измеряют спектрофотометрическим методом и определяют количество живых или мертвых клеток.
Тест высвобождения фермента ЛДГ. Другим методом, используемым при анализе жизнеспособности клеток, является определение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ), высвобождаемой из поврежденных или мертвых клеток в среду. (Декер и Ломанн-Мэттс, 1988; Корзеневский и Каллеварт, 1983). Лактатдегидрогеназа известна как цитоплазматический фермент, обнаруживаемый во всех клетках. Когда клетки подвергаются токсическому воздействию, их целостность плазматической мембраны нарушается, и фермент ЛДГ вытекает из клеток и проходит в среду. Таким образом, оценка ущерба проводится путем измерения активности фермента ЛДГ после воздействия.
Методы люминесценции:
Флуоресцентный тест Alamar Blue и другие методы флуоресценции: тест Alamar blue сначала использовался специалистами Erb и Ehlers (1950) для определения бактериального загрязнения в биологических жидкостях и молоке, а затем в исследовании Ahmed et al. (1950) адаптировал эти тесты в качестве дополнительного варианта для теста на включение радиоактивного [1994 H] тимидина. Этот метод основан на превращении соединения под названием аламар синий (ресазурин) в соединение резоруфина вместе с живыми клетками. Ресазурин известен как окислительно-восстановительный окислительно-синий краситель, который свободно проходит через клеточную мембрану, чтобы проникнуть в клетку, где он восстанавливается и превращается в флуоресцентное розовое соединение резоруфина. Мертвые клетки не могут уменьшить ресазурин и не способны генерировать флуоресцентный сигнал из-за потери метаболической активности. Полученный сигнал обнаруживается с помощью флуорометров, и интенсивность увеличивается с увеличением количества жизнеспособных клеток.
Тест на биолюминесценцию АТФ: растлители аденозинтрифосфата (АТФ) выступают в качестве источников энергии для биологических систем и могут быть обнаружены во всех метаболически активных клетках. (Крауч и др., 1993). После гибели клеток состояние синтеза АТФ в клетке исчезает, и эндогенные АТФазы быстро разлагают легко АТФ. По этой причине внутриклеточное содержание АТФ описывается как основной показатель жизнеспособности клеток и становится одним из методов определения жизнеспособности. Тест на биолюминесценцию АТФ был определен как самый быстрый, самый чувствительный и самый простой метод среди тестов на жизнеспособность, проведенных в нескольких местах (Ломакина и др., 2015; Рис и др., 2006).
Биолюминесцентный тест в реальном времени. Большинство тестов на жизнеспособность проводится в форме формата конечной точки, клетки которого не были разрушены или не подлежат дальнейшему исследованию, что делает невозможным кинетику и анализ токсичных веществ в реальном времени. Поскольку токсичность зависит от времени и дозы, влияние различных диапазонов доз можно понять только путем изучения в разное время. Подобно анализу биолюминесценции АТФ, фермент люцифераза также использовался в этом анализе, однако фермент люцифераза, использованный в этом анализе, был получен из другого организма. В качестве процесса люциферазы используется вещество, называемое коелентеразин.
Вы можете работать с нашей лабораторией EUROLAB для анализа цитотоксичности.