ความเป็นพิษต่อเซลล์หมายถึงอัตราการเกิดพิษในเซลล์ที่มีชีวิต มีการทดสอบจำนวนหนึ่งเพื่อทำความเข้าใจอัตราส่วนนี้ ตามจริงแล้วการทดสอบที่ประเมินโดยการวัดอัตราการแพร่กระจายและผลพิษในเซลล์นั้นเรียกว่าการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์

การทดสอบเหล่านี้รวบรวมภายใต้หัวข้อหลัก 3

• ทดสอบด้วยเกลือ Tetrazolium
• การทดสอบการปลดปล่อยเอนไซม์ LDH
• พวกเขาทำการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์รวมถึงวิธีการเรืองแสง

การทดสอบดำเนินการด้วยความช่วยเหลือของเกลือ tetrazolium: เกลือ Tetrazolium เป็นสารประกอบที่เป็นสารประกอบอินทรีย์เฮเทอโรไซคลิก มันถูกสังเคราะห์และระบุว่ามีสมาชิก 1000 มากกว่าปีที่ค้นพบ (Altman, 1976) นอกเหนือจากการลดเกลือของ Tetrazolium โดยการใช้อิเล็กตรอนแล้วมันยังช่วยเปลี่ยน formazan ให้เป็นโครงสร้างที่เรียกว่าการเปลี่ยนสี ปฏิกิริยาสีจะพบได้ในเซลล์ที่มีชีวิตเท่านั้น การทดสอบ Tetrazolium นั้นมีประสบการณ์ในสามขั้นตอน ในระยะแรกเซลล์ที่มีชีวิตจะสัมผัสกับสารพิษจำนวนหนึ่ง ในขั้นตอนที่สองสารพิษจะถูกลบออกจากกันและมีการเพิ่มสารประกอบและเตตร้าโซลีนและบ่มเป็นเวลา 1-4 ชั่วโมง ในขั้นตอนสุดท้ายการเปลี่ยนสีจะถูกวัดโดยวิธีสเปกโทรโฟโตเมตริกและการกำหนดจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ตายแล้ว

 LDH Enzyme Release Test: อีกวิธีหนึ่งที่ใช้ในการวิเคราะห์ความมีชีวิตของเซลล์คือการหากิจกรรมของแลคเตทดีไฮโดรจีเนส (LDH) ที่ปล่อยออกมาจากเซลล์ที่ถูกทำลายหรือเซลล์ที่ตายแล้วเข้าไปในตัวกลาง (ฉูดฉาดและ Lohmann-Matthes, 1988; Korzeniewski และ Callewaert, 1983) แลคเตทดีไฮโดรจีเนสเป็นเอนไซม์ไซโตพลาสซึมที่พบในทุกเซลล์ เมื่อเซลล์สัมผัสกับความเป็นพิษความสมบูรณ์ของเมมเบรนในพลาสมาจะหยุดชะงักและเอนไซม์ LDH จะรั่วไหลจากเซลล์และส่งผ่านไปยังตัวกลาง ดังนั้นการประเมินความเสียหายจะดำเนินการโดยการวัดกิจกรรมของเอนไซม์ LDH หลังจากได้รับสาร

วิธีการเรืองแสง:

การทดสอบ Alamar Blue Fluorescence และวิธีการเรืองแสงอื่น ๆ : การทดสอบ Alamar Blue ถูกใช้ครั้งแรกโดยบุคคล Erb และ Ehlers (1950) สำหรับการตรวจสอบการปนเปื้อนของแบคทีเรียในของเหลวและนมชีวภาพและต่อมาในการศึกษาของ Ahmed et al (1950) ปรับการทดสอบเหล่านี้เป็นตัวเลือกด้านการทดสอบการรวมตัวของกัมมันตรังสี [1994 H] thymidine วิธีนี้ขึ้นอยู่กับการแปลงสารประกอบที่เรียกว่าอะลามาร์บลู (resazurin) เป็นสารประกอบ resorufin ร่วมกับเซลล์ที่มีชีวิต Resazurine เป็นที่รู้จักกันในนาม redox ย้อมสีย้อมสีออกซิเดทีฟซึ่งผ่านอิสระผ่านเยื่อหุ้มเซลล์เพื่อเข้าสู่เซลล์ซึ่งจะลดลงและเปลี่ยนเป็นสารประกอบ resorufin สีชมพูเรืองแสง เซลล์ที่ตายแล้วไม่สามารถลดเรโซลูซีนและไม่สามารถสร้างสัญญาณเรืองแสงได้เนื่องจากการสูญเสียกิจกรรมการเผาผลาญ สัญญาณที่ได้จะถูกตรวจจับโดยการใช้ฟลูออโรมิเตอร์และความเข้มเพิ่มขึ้นเมื่อจำนวนเซลล์ที่ทำงานได้เพิ่มขึ้น

การทดสอบ ATP Bioluminescence: Molesters Adenosine triphosphate (ATP) ทำหน้าที่เป็นแหล่งพลังงานที่มีระบบชีวภาพและสามารถพบได้ในเซลล์ที่ใช้งานการเผาผลาญทั้งหมด (Crouch et al., 1993) หลังจากการตายของเซลล์สถานะการสังเคราะห์ ATP ของเซลล์จะหายไปและ ATP ที่อยู่ภายในนั้นจะทำการย่อยสลาย ATP อย่างรวดเร็ว ด้วยเหตุนี้เนื้อหา ATP ในเซลล์จึงถูกอธิบายว่าเป็นตัวบ่งชี้หลักของความมีชีวิตของเซลล์และมันได้กลายเป็นหนึ่งในวิธีการกำหนดความมีชีวิต ATP bioluminescence test ถูกกำหนดให้เป็นวิธีที่เร็วที่สุดอ่อนไหวที่สุดและง่ายที่สุดในบรรดาการทดสอบความมีชีวิตที่ดำเนินการเป็นทวีคูณ (Lomakina และคณะ, 2015; Riss et al., 2006)

การทดสอบการเรืองแสงชีวภาพแบบเรียลไทม์: การทดสอบความมีชีวิตส่วนใหญ่อยู่ในรูปแบบของจุดสิ้นสุดที่เซลล์ยังไม่ถูกทำลายหรือได้รับอนุญาตให้ตรวจสอบเพิ่มเติมทำให้จลนศาสตร์และการวิเคราะห์แบบเรียลไทม์ของสารพิษเป็นไปไม่ได้ เนื่องจากความเป็นพิษนั้นขึ้นอยู่กับเวลาและขนาดของยาผลกระทบของช่วงปริมาณที่แตกต่างกันสามารถเข้าใจได้โดยการศึกษาภายในเวลาที่ต่างกันเท่านั้น คล้ายกับ ATP bioluminescence assay เอนไซม์ luciferase ก็ถูกใช้ในการทดลองนี้เช่นกันอย่างไรก็ตามเอนไซม์ luciferase ที่ใช้ในการทดสอบนี้ได้มาจากสิ่งมีชีวิตที่แตกต่างกัน ในฐานะที่เป็นกระบวนการ luciferase สารที่เรียกว่า coelenterazine ถูกนำมาใช้

คุณสามารถทำงานกับ EUROLAB ในห้องปฏิบัติการของเราเพื่อทดสอบความเป็นพิษของเซลล์