Ang Cyototoxicity ay tumutukoy sa rate ng mga nakakalason na epekto sa isang buhay na cell. Ang isang bilang ng mga pagsubok ay isinagawa upang maunawaan ang ratio na ito. Sa katunayan, ang mga pagsubok na nasuri sa pamamagitan ng pagsukat ng paglaki ng rate sa cell at ang nakakalason na epekto nito sa cell ay tinatawag na mga pagsubok sa cytotoxicity.

Ang mga pagsubok na ito ay pinagsama sa ilalim ng 3 pangunahing mga heading.

• Mga pagsubok na may mga tetrazolium asing-gamot
• Ang pagsubok ng paglabas ng enzyme ng LDH
• Bumubuo sila ng mga pagsubok sa cytotoxicity kabilang ang mga pamamaraan ng luminescence.

Ang mga pagsusuri na isinasagawa sa tulong ng mga tetrazolium asing-gamot: Ang Tetrazolium asing-gamot ay mga compound na may heterocyclic organikong istraktura. Ito ay synthesized at tinukoy na may higit sa 1000 mga miyembro mula pa noong mga taon na natuklasan ito (Altman, 1976). Kasabay ng pagbawas ng mga tetrazolium asing-gamot sa pamamagitan ng pagkuha ng mga elektron, nakakatulong din ito upang ibahin ang anyo ng formazan sa isang istraktura na tinatawag na pagbabago ng kulay. Ang mga reaksyon ng kulay ay matatagpuan lamang sa mga buhay na selula. Ang mga pagsubok sa Tetrazolium ay naranasan sa tatlong yugto. Sa unang yugto, ang mga buhay na cell ay nakalantad sa isang tiyak na halaga ng nakakalason na sangkap. Sa ikalawang hakbang, ang nakakalason na sangkap ay tinanggal mula sa bawat isa at ang tetrazolium compound ay idinagdag at natupok sa loob ng 1-4 na oras. Sa mga huling yugto, ang pagbabago ng kulay ay sinusukat ng pamamaraang spectrophotometric at ang pagpapasiya ng bilang ng mga live o patay na cells ay nangyayari.

 LDH Enzyme Release Test: Ang isa pang pamamaraan na ginamit sa pagsusuri ng cell viability ay ang pagpapasiya ng aktibidad ng lactate dehydrogenase (LDH) na pinakawalan mula sa nasira o patay na mga cell sa medium. (Decker at Lohmann-Matthes, 1988; Korzeniewski at Callewaert, 1983). Ang lactate dehydrogenase ay kilala bilang isang cytoplasmic enzyme na matatagpuan sa lahat ng mga cell. Kapag ang mga cell ay nakalantad sa mga nakakalason na epekto, ang kanilang integridad ng lamad ng plasma ay nagambala at ang LDH enzyme ay tumulo mula sa mga cell at pumasa sa daluyan. Kaya, ang pagtatasa ng pinsala ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagsukat ng aktibidad ng enzyme ng LDH pagkatapos ng pagkakalantad.

Mga Paraan ng Luminescence:

Alamar Blue Fluorescence Test at Iba pang Mga Pamamaraan ng Fluorescence: Ang asul na pagsubok sa Alamar ay unang ginamit nina Erb at Ehlers (1950) noong 1950s para sa pagpapasiya ng kontaminasyon ng bakterya sa mga likidong biolohiko at gatas, na sinundan ni Ahmed et al. (1994) inangkop ang mga pagsubok na ito bilang isang pagpipilian sa panig ng radioactive [3H] thymidine conjugation test. Ang pamamaraan na ito ay batay sa pagbabago ng compound na tinatawag na alamar asul (resazurin) sa compound ng resorufin kasama ang mga nabubuhay na cells. Ang Resazurin ay kilala bilang isang asul na redox dye sa form na oxidative nito, na malayang pumasa sa lamad ng cell upang makapasok sa cell, kung saan ito ay nabawasan at nagbago sa isang fluorescent pink resorufin compound. Ang mga patay na selula ay hindi maaaring mabawasan ang resazurine dahil sa pagkawala ng aktibidad ng metabolic at hindi may kakayahang makabuo ng signal ng fluorescence. Ang nagresultang signal ay napansin sa pamamagitan ng paggamit ng isang fluorometer at habang ang bilang ng mga maaaring mabuhay na mga cell ay tumataas, tumindi ang signal.

Pagsubok sa ATP Bioluminescence: Ang mga molester ng Adenosine triphosphate (ATP) ay kumikilos bilang mga mapagkukunan ng enerhiya na may mga biological system at matatagpuan sa lahat ng mga metabolikong aktibong selula. (Crouch et al., 1993). Kasunod ng pagkamatay ng cell, ang estado ng ATP synthesis ng cell ay naglaho at ang mga endogenous na ATPases ay nagsasagawa ng mabilis na pagkasira ng madaling ATP. Para sa kadahilanang ito, ito ay inilarawan bilang pangunahing tagapagpahiwatig ng kakayahang kumita ng cell sa intracellular ATP na nilalaman at nagsimula na itong maganap sa mga pamamaraan ng pagpapasiya ng posibilidad. Ang pagsubok na bioluminescence ng ATP ay tinukoy bilang ang pinakamabilis, pinaka-sensitibo at pinakamadaling pamamaraan sa mga pagsusulit na maaaring isagawa sa maraming mga (Lomakina et al., 2015; Riss et al., 2006).

Real Time Bioluminescence Test: Karamihan sa mga pagsubok sa posibilidad ay nasa anyo ng isang end-point format kung saan ang mga cell ay nawasak o hindi pinapayagan na higit pang sinisiyasat, na ginagawang imposible ang mga kinetics at real-time na pagsusuri ng mga nakakalason na sangkap. Dahil ang toxicity ay oras at dosis ay nakasalalay, ang mga epekto ng iba't ibang mga saklaw ng dosis ay maiintindihan lamang sa pamamagitan ng pag-aaral sa loob ng iba't ibang oras. Katulad sa ATP bioluminescence assay, ang luciferase enzyme ay ginamit din sa assay na ito.Ngayon, ang luciferase enzyme na ginamit sa assay na ito ay nakuha mula sa iba't ibang organismo. Bilang proseso ng luciferase, ginagamit ang isang sangkap na tinatawag na coelenterazine.

Maaari kang gumana sa aming laboratoryo ng EUROLAB para sa mga pagsubok sa cytotoxicity.