Citotoxicitatea se referă la rata efectelor toxice dintr-o celulă vie. Un număr de teste sunt efectuate pentru a înțelege acest raport. De fapt, testele care sunt evaluate prin măsurarea ratei de proliferare și a efectelor toxice din celulă se numesc teste de citotoxicitate.
Aceste teste sunt colectate sub tema principală 3.
- Teste cu săruri de tetrazoliu
- Testul de eliberare a enzimei LDH
- Ele formează teste de citotoxicitate, inclusiv metode de luminiscență.
Teste efectuate cu ajutorul sărurilor de tetrazoliu: Sărurile de tetrazoliu sunt compuși care sunt compuși organici heterociclici. Acesta a fost sintetizat și identificat cu mai mult de membri 1000 din anii în care a fost descoperit (Altman, 1976). Împreună cu reducerea sărurilor de tetrazoliu prin luarea de electroni, ajută de asemenea transformarea formazanului într-o structură numită schimbare de culoare. Reacțiile de culoare se găsesc numai în celulele vii. Testele de tetrazoliu sunt experimentate în trei etape. În prima etapă, celulele vii sunt expuse la o anumită cantitate de substanță toxică. În a doua etapă, substanța toxică este îndepărtată una de cealaltă și se adaugă compusul tetrazoliu și se incubează timp de ore 1-4. În ultimele etape, schimbarea culorii se măsoară prin metoda spectrofotometrică și se determină numărul de celule vii sau moarte.
Testul de eliberare a enzimei LDH: O altă metodă utilizată în analiza viabilității celulare este determinarea activității lactatului dehidrogenazei (LDH) eliberată din celulele deteriorate sau moarte în mediu. (Decker și Lohmann-Matthes, 1988, Korzeniewski și Callewaert, 1983). Lactatul dehidrogenaza este cunoscut ca o enzimă citoplasmatică găsită în toate celulele. Atunci când celulele sunt expuse la efecte toxice, integritatea membranei lor plasmatice este întreruptă și enzima LDH scurgeri din celule și trece în mediu. Astfel, evaluarea daunelor se realizează prin măsurarea activității enzimei LDH după expunere.
Metode de luminescență:
Testul de fluorescență albastră a alamar și alte metode de fluorescență: Testul albastru Alamar a fost folosit pentru prima dată de persoanele Erb și Ehlers (1950) pentru determinarea contaminării bacteriene în fluide biologice și lapte și mai târziu în studiul lui Ahmed și colab. (1950) a adaptat aceste teste ca o opțiune laterală la testul de încorporare a timidinei radioactive [1994 H]. Această metodă se bazează pe conversia compusului numit alamar albastru (resazurină) la compusul resorufin împreună cu celulele vii. Resazurina este cunoscută ca o redox oxidant albastru oxidant, care trece liber prin membrana celulară pentru a intra în celulă, unde este redusă și transformată într-un compus resorufin roz fluorescent. Celulele moarte nu pot reduce resazurina și nu sunt capabile să genereze un semnal de fluorescență din cauza pierderii activității metabolice. Semnalul rezultat este detectat prin utilizarea fluorometrelor, iar intensitatea crește odată cu creșterea numărului de celule viabile.
Testul de bioluminescență ATP: Moleștele de adenozin trifosfat (ATP) acționează ca surse de energie cu sisteme biologice și pot fi găsite în toate celulele active metabolic. (Crouch și colab., 1993). După moartea celulei, starea de sinteză a celulei ATP dispare, iar ATP-urile endogene realizează o degradare rapidă a ATP cu ușurință. Din acest motiv, conținutul ATP intracelular a fost descris ca principalul indicator al viabilității celulare și devine una dintre metodele de determinare a viabilității. Testul de bioluminescență ATP a fost definit ca metoda cea mai rapidă, mai sensibilă și mai simplă dintre testele de viabilitate efectuate în multipli (Lomakina și colab., 2015, Riss și colab., 2006).
Testul de bioluminescență în timp real: Majoritatea testelor de viabilitate sunt sub forma unui format de punct final, ale cărui celule nu au fost distruse sau au fost permise să fie investigate în continuare, făcând imposibilă analiza cinetică și analiza în timp real a substanțelor toxice. Deoarece toxicitatea este dependentă de timp și de doză, efectele intervalelor de doză diferite pot fi înțelese numai prin studierea în momente diferite. Similar cu testul de bioluminescență ATP, enzima luciferază a fost de asemenea utilizată în acest test. Cu toate acestea, enzima luciferază utilizată în acest test a fost obținută de la un organism diferit. Ca proces de luciferază, se folosește o substanță numită coelenterazină.
Puteți lucra cu laboratorul nostru EUROLAB pentru testele de citotoxicitate.