साइटोटोक्सिसिटी टेस्ट

साइटोटोक्सिसिटी टेस्ट प्रयोगशाला

साइटोटोक्सिसिटी एक जीवित कोशिका में विषाक्त प्रभावों की दर को संदर्भित करता है। इस अनुपात को समझने के लिए कई परीक्षण किए जाते हैं। तथ्य के रूप में, जो परीक्षण कोशिका में प्रसार दर और विषाक्त प्रभावों को मापकर मूल्यांकन किए जाते हैं, उन्हें साइटोटेक्विटी टेस्ट कहा जाता है।

ये परीक्षण मुख्य विषय 3 के तहत एकत्र किए गए हैं।

  • टेट्राजोलियम लवण के साथ परीक्षण
  • एलडीएच एंजाइम रिलीज टेस्ट
  • वे ल्यूमिनेसिसेंस विधियों सहित साइटोटोक्सिसिटी परीक्षण बनाते हैं।

टेट्राजोलियम लवण की सहायता से किए गए परीक्षण: टेट्राजोलियम लवण यौगिक होते हैं जो हेटरोसाइक्लिक कार्बनिक यौगिक होते हैं। यह उन वर्षों से 1000 से अधिक सदस्यों के साथ संश्लेषित और पहचाना गया है, जब यह (Altman, 1976) खोजा गया था। इलेक्ट्रॉनों को लेने से टेट्राजोलियम लवण में कमी के साथ, यह फॉर्मेज़न को रंग परिवर्तन नामक संरचना में बदलने में भी मदद करता है। रंग प्रतिक्रिया केवल जीवित कोशिकाओं में पाए जाते हैं। टेट्राजोलियम परीक्षण तीन चरणों में अनुभव किया जाता है। पहले चरण में, जीवित कोशिकाओं को एक निश्चित मात्रा में विषाक्त पदार्थ के संपर्क में लाया जाता है। दूसरे चरण में, विषाक्त पदार्थ को एक दूसरे से निकाल दिया जाता है और टेट्राजोलियम यौगिक को जोड़ा जाता है और 1-4 घंटों के लिए इनक्यूबेट किया जाता है। अंतिम चरणों में, रंग परिवर्तन को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि द्वारा मापा जाता है और जीवित या मृत कोशिकाओं की संख्या का निर्धारण होता है।

 एलडीएच एंजाइम रिलीज टेस्ट: सेल व्यवहार्यता के विश्लेषण में उपयोग की जाने वाली एक अन्य विधि, क्षतिग्रस्त या मृत कोशिकाओं से माध्यम में जारी लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (एलडीएच) गतिविधि का निर्धारण है। (डेकर और लोहमन-मैथ्स, एक्सएनयूएमएक्स; कोरज़ेनवीस्की और कैल्वर्ट, एक्सएनयूएमएक्स)। लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज को सभी कोशिकाओं में पाए जाने वाले साइटोप्लाज्मिक एंजाइम के रूप में जाना जाता है। जब कोशिकाओं को विषाक्त प्रभावों के संपर्क में लाया जाता है, तो उनके प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता बाधित होती है और एलडीएच एंजाइम कोशिकाओं से लीक होकर माध्यम से गुजरता है। इस प्रकार, जोखिम मूल्यांकन जोखिम के बाद एलडीएच एंजाइम गतिविधि को मापने के द्वारा किया जाता है।

Luminescence तरीके:

अलमार ब्लू फ़्लोरेसेंस टेस्ट और अन्य फ़्लोरेसेंस विधि: जैविक और तरल पदार्थों और दूध में बैक्टीरिया के संदूषण के निर्धारण के लिए पहले एल्ब और एह्लर्स (1950) व्यक्तियों द्वारा अलमार ब्लू टेस्ट का उपयोग किया गया था और बाद में अहमद एट अल के अध्ययन में। (1950) ने इन परीक्षणों को रेडियोधर्मी [1994 H] थाइमिडीन निगमन परीक्षण के एक साइड विकल्प के रूप में अनुकूलित किया। यह विधि जीवित कोशिकाओं के साथ मिलकर रिसोर्यूफिन यौगिक को अलमार ब्लू (रेजाज़ुरिन) नामक यौगिक के रूपांतरण पर आधारित है। रेसज़्यूरिन को एक ऑक्सीडेटिव ब्लू डाई रेडॉक्स के रूप में जाना जाता है, जो सेल झिल्ली में सेल में प्रवेश करने के लिए स्वतंत्र रूप से गुजरता है, जहां यह कम हो जाता है और एक फ्लोरोसेंट गुलाबी रेसोरोफिन यौगिक में बदल जाता है। मृत कोशिकाएं रेजेज़्यूरिन को कम नहीं कर सकती हैं और चयापचय गतिविधि के नुकसान के कारण प्रतिदीप्ति संकेत पैदा करने में सक्षम नहीं हैं। परिणामस्वरूप सिग्नल का पता फ्लोरोमीटर के उपयोग से लगाया जाता है और व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्या बढ़ने के साथ तीव्रता बढ़ जाती है।

एटीपी Bioluminescence टेस्ट: एडेनोसिन ट्राइफॉस्फेट (एटीपी) मोलेस्टर जैविक प्रणालियों के साथ ऊर्जा स्रोतों के रूप में कार्य करता है और सभी चयापचय सक्रिय कोशिकाओं में पाया जा सकता है। (क्राउच एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। कोशिका मृत्यु के बाद, सेल का एटीपी संश्लेषण राज्य गायब हो जाता है, और अंतर्जात एटीपीसेस रीड एटीपी का तेजी से क्षरण करता है। इस कारण से, इंट्रासेल्युलर एटीपी सामग्री को सेल व्यवहार्यता का मुख्य संकेतक बताया गया है और यह व्यवहार्यता निर्धारण के तरीकों में से एक बन रहा है। मल्टीपल्स (लोमकिना एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स; आरआईएस एट अल।, एक्सएनयूएमएनएक्स) में किए गए व्यवहार्यता परीक्षणों के बीच एटीपी बायोलुमिनेसिस परीक्षण को सबसे तेज, सबसे संवेदनशील और सबसे आसान विधि के रूप में परिभाषित किया गया है।

रियल टाइम बायोलुमिनेसिस टेस्ट: अधिकांश व्यवहार्यता परीक्षण एक एंड-पॉइंट प्रारूप के रूप में होते हैं जिनकी कोशिकाओं को नष्ट नहीं किया गया है या आगे की जांच करने की अनुमति नहीं है, जिससे कैनेटीक्स और विषाक्त पदार्थों के वास्तविक समय का विश्लेषण असंभव है। क्योंकि विषाक्तता समय और खुराक पर निर्भर है, अलग-अलग खुराक श्रेणियों के प्रभाव को अलग-अलग समय के भीतर अध्ययन करके ही समझा जा सकता है। एटीपी बायोल्यूमिनेशन परख के समान, इस परख में ल्यूसिफरेज एंजाइम का भी उपयोग किया गया था। हालांकि, इस परख में इस्तेमाल किया जाने वाला ल्यूसिफरेज एंजाइम एक अलग जीव से प्राप्त किया गया था। ल्यूसिफेरेज प्रक्रिया के रूप में, कोइलेंटरजीन नामक पदार्थ का उपयोग किया जाता है।

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